技術(shù)簡(jiǎn)介

CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是蛋白質(zhì)-DNA互作關(guān)系研究的新方法，是新一代超微量ChIP-Seq技術(shù)，適用于無(wú)ChIP級(jí)別抗體的蛋白研究。與傳統(tǒng)的ChIP-Seq研究方法相比，該技術(shù)無(wú)需交聯(lián)、超聲打斷、末端抹平和接頭連接等操作，因此具有省時(shí)高 效、所需的樣品量少、背景信號(hào)低和可重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，甚至可用于單細(xì)胞水平測(cè)序。CUT&Tag有望將蛋白質(zhì)-DNA互作的研究變成一種類似PCR反應(yīng)的常規(guī)操作，對(duì)基因調(diào)控、表觀遺傳等領(lǐng)域的研究具有革命性的意義。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

  樣品起始量低：能夠?qū)吧倭繕悠愤M(jìn)行分析

  無(wú)需ChIP級(jí)別抗體：無(wú)需提供ChIP級(jí)別抗體

  性價(jià)比高：背景噪音低，所需測(cè)序深度少

  實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好：實(shí)驗(yàn)重復(fù)結(jié)果一致性好

技術(shù)原理

ChiTag是Protein AG蛋白與Tn5轉(zhuǎn)座酶的融合蛋白，當(dāng)抗體結(jié)合目的蛋白（如轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白等）后，Protein AG蛋白可直接結(jié)合抗體，攜帶的Tn5轉(zhuǎn)座酶可特異性的切割目的蛋白附近的DNA pian段，并將DNA pian段連上接頭，文庫(kù)構(gòu)建之后可進(jìn)行高通量測(cè)序。

圖注： CUT&Tag實(shí)驗(yàn)流程

案例解析

CUT&Tag技術(shù)研究蛋白質(zhì)-DNA互作的優(yōu)勢(shì)

原文：CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells

期刊：Nature Communications 發(fā)表時(shí)間：20190429 影響因子： 11.878

在生物學(xué)研究中，DNA與蛋白質(zhì)之間的互作是至關(guān)重要的，參與基因的表達(dá)、調(diào)控、復(fù)制、重組和修復(fù)以及RNA的轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯和調(diào)控等多個(gè)過程，幾乎涉及所有的生命活動(dòng)。目前研究?jī)烧呋プ鞯姆椒ê芏?，作者選擇了傳統(tǒng)的研究手段ChIP-seq，優(yōu)化的CUT&RUN方法，以及新方法CUT&Tag共同研究組蛋白H3K27me3。通過比對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)CUT&Tag有*低的背景噪聲以及zui強(qiáng)的信號(hào)。通過對(duì)H3K4me1修飾物進(jìn)行分析，顯示CUT&Tag的靈敏度*高，實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性*好。

圖注. CUT&Tag方法的優(yōu)點(diǎn)

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